2023, 29(6):112-118.DOI: 10.11798/j.issn.1007-1520.202322445
摘要:变应性鼻炎(AR)是机体经变应原诱发产生的常见良性变态反应性疾病。除了与过敏相关的鼻部和眼部症状外,还会导致睡眠质量下降,白天生活质量降低等问题,影响患者的工作和生活。目前AR的治疗方法是以远离变应原及药物控制为主,且在疗效上有其局限性和弊端。干细胞疗法的应用在各疾病的治疗中正在得到极大地发展。脂肪来源的间充质干细胞(MSCs)因其独特的免疫调节及抗炎等作用以及获取方便等优势,在AR的治疗上具有相当的潜力。本文就脂肪来源MSCs治疗AR的实验研究进展作一综述。
2019, 25(4):412-418.DOI: 10.11798/j.issn.1007-1520.201904016
摘要:目的研究成人鼻腔呼吸黏膜内间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的分化特征及其多向诱导分化潜能。方法取材及细胞外培养成人鼻腔呼吸黏膜,鼻黏膜组织切片及MSCs免疫荧光染色(体外培养),鼻黏膜MSCs向成骨细胞诱导分化及向神经细胞诱导分化。结果Vimentin抗体及Nestin抗体免疫荧光染色成人下鼻甲黏膜冷冻切片显示,双标记的阳性细胞为卵圆形或圆形,在鼻黏膜固有层中广泛分布。免疫荧光染色结果显示干细胞标志蛋白Sall4、CD133、Nestin、Vimentin受传代培养的MSCs表达。钙结节的茜素红染色结果:向成骨细胞诱导培养鼻黏膜MSCs 2周后,茜素红染色显示有大量红色钙结节存在于细胞表面,没有显著钙结节存在于未经诱导的MSCs表面,只有少量茜素红着色;碱性磷酸酶染色结果:碱性磷酸酶染色在向成骨细胞诱导培养鼻黏膜MSCs 2周后呈紫蓝色,未经诱导的MSCs具有极浅的染色。用神经诱导培养液进行2周的诱导后,细胞向神经细胞样显著分化,可见大部分细胞呈BM88与NF200免疫染色阳性,细胞将多根细长突起发出并相互连接,对照组细胞具有极弱的荧光染色,为长梭形。结论成人鼻腔呼吸黏膜内MSCs广泛存在,具有多向诱导分化潜能,在对骨与软组织损伤进行自体移植修复的过程中可以作为种子细胞得到有效应用,期待临床进一步验证。
2017, 23(4):353-358.DOI: 10.11798/j.issn.1007-1520.201704014
摘要:目的建立豚鼠骨髓间充质干细胞(bonemesenchymal stem cells,BMSCs)的体外培养体系,体外脂质体2000介导神经营养因子3(neurotrophic factor3,NT3)转染BMSCs,为内耳移植提供前期研究基础。方法①采用全骨髓贴壁法培养豚鼠BMSCs并传代,取P3代做生长曲线图,流式细胞仪上检测BMSCs的表面标志物CD29,CD90以及造血细胞表面标志物CD45;②按照不同质粒-脂质体配比介导pEGFPN1NT3转染P3代BMSCs,转染后48 h计算转染效率,选择最佳配比将pEGFPN1NT3质粒转染P3代BMSCs,转染后1、3、7、14 d,观察其荧光表达情况;③转染后3 d的BMSCs提取蛋白,Western Blot验证NT3蛋白表达。结果①全骨髓贴壁法获得细胞数量多,增殖快,传代可以纯化细胞。生长曲线符合Logistic生长曲线。流式细胞仪检测细胞CD29和CD90阳性表达,CD45阴性表达,符合BMSCs特征;②不同配比中质粒:脂质体为4 μg:12 μl时转染率最高,为最佳配比;③转染后48 h荧光表达较强,7 d荧光表达但较前明显减弱,14 d基本未见明显荧光表达。Western Blot验证NT3基因成功表达。结论①全骨髓贴壁法可以成功培养出增殖快,细胞纯度高的BMSCs;②脂质体法成功介导NT3真核质粒在BMSCs内表达,BMSCs可能作为内耳基因治疗的理想载体。
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